assaygenie HUFI07676說(shuō)明書(shū)
貨號(hào)：
HUFI07676
該測(cè)定法的Genie人類過(guò)氧化氫酶ELISA試劑盒可以在下列樣品中測(cè)定人類過(guò)氧化氫酶：血清，血液，血漿，細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其他相關(guān)的上清液和組織。
我們的人過(guò)氧化氫酶 ELISA 試劑盒如何工作？
Assay Genie（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）測(cè)定試劑盒設(shè)計(jì)用于定量測(cè)量各種樣品中的分析物。由于當(dāng)今的科學(xué)家需要高影響力期刊的高質(zhì)量一致數(shù)據(jù)，因此 Assay Genie 開(kāi)發(fā)了我們靈敏、快速和可靠的 ELISA 試劑盒檢測(cè)系列，以滿足并超越這些需求。我們的檢測(cè)試劑盒使用定量夾心 ELISA 技術(shù)，每個(gè)試劑盒都帶有預(yù)包被在 96 孔微量滴定板上的高度特異性抗體。
在 Assay Genie，我們了解對(duì)速度的需求！因此，我們開(kāi)發(fā)了一種超快速方案，這意味著您可以快速獲得結(jié)果。因此，一旦您準(zhǔn)備好并鋪板了樣品、空白和標(biāo)準(zhǔn)品，您只需使用高度特異性的生物素偶聯(lián)一抗和偶聯(lián)辣根過(guò)氧化物酶 (HRP) 的親和素進(jìn)行孵育，然后孵育適當(dāng)?shù)臅r(shí)間。根據(jù)協(xié)議洗滌板并添加 TMB（3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺）溶液后，由于 HRP 催化的酶促反應(yīng)，應(yīng)檢測(cè)到藍(lán)色的出現(xiàn)。下一步是添加終止溶液，終止 HRP 反應(yīng)，藍(lán)色變?yōu)辄S色，信號(hào)強(qiáng)度在 450nm 讀板器上測(cè)量。
| 產(chǎn)品代碼 | HUFI07676 | ||||||||||||||||
| 別名 | CAT ELISA 試劑盒、Cas1 ELISA 試劑盒、Cs-1 ELISA 試劑盒、過(guò)氧化氫酶 ELISA 試劑盒 | ||||||||||||||||
| 檢測(cè)方法 | 夾心ELISA，雙抗體 | ||||||||||||||||
| 應(yīng)用 | 該免疫測(cè)定試劑盒允許體外定量測(cè)定血清血漿和其他生物體液中的人 CAT（過(guò)氧化氫酶）濃度。 | ||||||||||||||||
| 尺寸 | 96T | ||||||||||||||||
| 范圍 | 15.625-1000pg/ml | ||||||||||||||||
| 靈敏度 | < 9.375pg/ml | ||||||||||||||||
| 貯存 | 4'C 6 個(gè)月 | ||||||||||||||||
| 恢復(fù) | 下面列出的基質(zhì)中加入了一定水平的人 CAT（過(guò)氧化氫酶），通過(guò)將測(cè)量值與樣品中人 CAT（過(guò)氧化氫酶）的預(yù)期量進(jìn)行比較來(lái)計(jì)算回收率。
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| 線性度 | 該試劑盒的線性通過(guò)測(cè)試添加適當(dāng)濃度的人 CAT（過(guò)氧化氫酶）及其系列稀釋液的樣品進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果通過(guò)計(jì)算濃度與預(yù)期濃度的百分比來(lái)證明。
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| 簡(jiǎn)歷（％） | 批內(nèi)：CV<8% | ||||||||||||||||
| 筆記 | 僅供研究使用 |
以下方案是使用生物素化檢測(cè)抗體和鏈霉親和素-HRP 的人 CAT（過(guò)氧化氫酶）ELISA 試劑盒的示例方案。夾心 ELISA 試劑盒允許通過(guò)使用已知分析物濃度作為標(biāo)準(zhǔn)并繪制已知濃度與已知標(biāo)準(zhǔn)濃度的吸光度來(lái)檢測(cè)和量化樣品中的分析物。這使研究人員可以計(jì)算樣品中存在的人類 CAT（過(guò)氧化氫酶）抗體的數(shù)量。
在加入孔之前，在 37°C 下平衡 SABC 工作溶液和 TMB 底物至少 30 分鐘。稀釋樣品和試劑時(shí)，必須*混合均勻。建議為每個(gè)測(cè)試?yán)L制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
| 1. | 在預(yù)涂板上分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)、測(cè)試樣品和控制（零）孔，然后記錄它們的位置。建議重復(fù)測(cè)量每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)和樣品。在添加標(biāo)準(zhǔn)、樣品和對(duì)照（零）孔之前洗板 2 次！ |
| 2. | 將 0.1ml 標(biāo)準(zhǔn)溶液分裝到標(biāo)準(zhǔn)孔中。 |
| 3. | 將 0.1 ml 樣品/標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液加入對(duì)照（零）孔中。 |
| 4. | 將 0.1 ml 適當(dāng)稀釋的樣品（人血清、血漿、組織勻漿和其他生物體液）加入測(cè)試樣品孔中。 |
| 5. | 用蓋子密封板并在 37°C 下孵育 90 分鐘。 |
| 6. | 取下蓋子并丟棄板內(nèi)容物，將板拍在吸水濾紙或其他吸水材料上。任何時(shí)候都不要讓孔*干燥。洗板 X2。 |
| 7. | 向上述孔（標(biāo)準(zhǔn)孔、測(cè)試樣品孔和零孔）中加入 0.1 ml 生物素檢測(cè)抗體工作液。在不接觸側(cè)壁的情況下在每個(gè)孔的底部添加溶液。 |
| 8. | 用蓋子密封板并在 37°C 下孵育 60 分鐘。 |
| 9. | 取下蓋子，用洗滌緩沖液洗滌板 3 次。讓洗滌緩沖液在每次洗滌之間在井中休息 1 分鐘。 |
| 10. | 每孔加入 0.1 ml SABC 工作液，蓋上板，37°C 孵育 30 分鐘。 |
| 11. | 取下蓋子，用洗滌緩沖液洗板 5 次，每次讓洗滌緩沖液在孔中停留 1-2 分鐘。 |
| 12. | 向每個(gè)孔中加入 90 µl TMB 底物，蓋上板并在 37°C 下避光孵育 10-20 分鐘。（注：此孵育時(shí)間僅供參考，最佳時(shí)間由最終用戶決定。）在前 3-4 孔（標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度最高）中可以看到藍(lán)色陰影，其他孔顯示沒(méi)有明顯的顏色。 |
| 13. | 在每個(gè)孔中加入 50 µl 停止溶液并充分混合。顏色立即變?yōu)辄S色。 |
| 14. | 添加終止溶液后，立即在酶標(biāo)儀中讀取 450 nm 處的 OD 吸光度。 |
人 CAT（過(guò)氧化氫酶）ELISA 試劑盒組件 | 96 檢測(cè) | 貯存 |
| ELISA 微孔板（可拆卸） | 8×12 條 | 4°C 6 個(gè)月 |
| 凍干標(biāo)準(zhǔn)品 | 2 | 4°C/-20°C |
| 樣品/標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液 | 20毫升 | 4°C |
| 生物素標(biāo)記抗體（濃縮） | 120ul | 4°C（避光） |
| 抗體稀釋緩沖液 | 10毫升 | 4°C |
| HRP-鏈霉親和素偶聯(lián)物(SABC) | 120ul | 4°C（避光） |
| SABC 稀釋緩沖液 | 10毫升 | 4°C |
| TMB底物 | 10毫升 | 4°C（避光） |
| 停止解決方案 | 10毫升 | 4°C |
| 洗滌緩沖液（25X） | 30毫升 | 4°C |
| 封板機(jī) | 5 | —— |
Assay Genie Human CAT（過(guò)氧化氫酶）ELISA 試劑盒需要其他設(shè)備和材料來(lái)進(jìn)行檢測(cè)。請(qǐng)參閱下面的列表了解更多詳情。
帶 450 nm 波長(zhǎng)濾光片的酶標(biāo)儀
多通道移液器、移液器、微量離心管和一次性移液器吸頭
孵化器
去離子水或蒸餾水
吸水紙
緩沖水庫(kù)
在進(jìn)行 ELISA 檢測(cè)時(shí)，重要的是準(zhǔn)備您的樣品以達(dá)到可能的最佳結(jié)果。下面我們列出了為不同樣品類型準(zhǔn)備樣品的程序。
| 樣品類型 | 協(xié)議 |
血清 | 如果使用血清分離管，讓樣品在室溫下凝結(jié) 30 分鐘。以 1,000x g 離心 10 分鐘。立即收集血清部分并進(jìn)行檢測(cè)或等分并將樣品儲(chǔ)存在 -80°C。避免多次凍融循環(huán)。 如果不使用血清分離管，讓樣品在 2-8°C 下凝結(jié)過(guò)夜。以 1,000x g 離心 10 分鐘。立即取出血清并進(jìn)行檢測(cè)，或?qū)悠返确植?chǔ)存在 -80°C 下。避免多次凍融循環(huán)。 |
等離子體 | 使用 EDTA 或肝素作為抗凝劑收集血漿。在收集后 30 分鐘內(nèi)，將樣品在 4°C 下以 1000 × g 離心 15 分鐘。立即收集血漿部分并進(jìn)行檢測(cè)或等分并將樣品儲(chǔ)存在 -80°C。避免多次凍融循環(huán)。注意：過(guò)度溶血的樣品不適合與該試劑盒一起使用。 |
尿液和腦脊液 | 在無(wú)菌容器中收集尿液（中流），以 2000-3000 rpm 離心 20 分鐘。立即取出上清液并進(jìn)行檢測(cè)。如果檢測(cè)到任何沉淀，請(qǐng)重復(fù)離心步驟。類似的協(xié)議可用于腦脊液。 |
細(xì)胞培養(yǎng)上清 | 用移液管收集細(xì)胞培養(yǎng)基，然后在 4°C 下以 1500 rpm 離心 20 分鐘。立即收集澄清的上清液并進(jìn)行檢測(cè)。 |
細(xì)胞裂解液 | 在裂解緩沖液中溶解細(xì)胞，并在冰上靜置 30 分鐘。以 14,000 xg 離心管 5 分鐘以去除不溶性物質(zhì)。將上清液分裝到新管中并丟棄剩余的全細(xì)胞提取物。使用總蛋白質(zhì)測(cè)定法量化總蛋白質(zhì)濃度。立即測(cè)定或分裝并儲(chǔ)存在 ≤ -20 °C。 |
組織勻漿 | 組織勻漿的制備將因組織類型而異。用 1X PBS 沖洗組織以去除多余的血液并在 20ml 1X PBS（包括蛋白酶抑制劑）中勻漿，并在 ≤ -20°C 下儲(chǔ)存過(guò)夜。打破細(xì)胞膜需要兩個(gè)凍融循環(huán)。為了進(jìn)一步破壞細(xì)胞膜，您可以對(duì)樣品進(jìn)行超聲處理。以 5000xg 離心勻漿 5 分鐘。立即取出上清液并進(jìn)行檢測(cè)，或等分并儲(chǔ)存在 -20°C 或 -80°C。 |
組織裂解物 | 用 PBS 沖洗組織，切成 1-2 毫米的碎片，并用 PBS 中的組織勻漿器勻漿。加入等體積的含有蛋白酶抑制劑的 RIPA 緩沖液，并在室溫下輕輕攪拌裂解組織 30 分鐘。離心去除碎屑。使用總蛋白質(zhì)測(cè)定法量化總蛋白質(zhì)濃度。立即測(cè)定或分裝并儲(chǔ)存在 ≤ -20 °C。 |
母乳 | 收集牛奶樣品并在 4°C 下以 10,000 xg 離心 60 分鐘。分裝上清液并進(jìn)行測(cè)定。如需長(zhǎng)期使用，請(qǐng)將樣品儲(chǔ)存在 -80°C。盡量減少冷凍/解凍周期。 |
| UniProt 蛋白質(zhì)功能： | 過(guò)氧化氫酶：幾乎存在于所有有氧呼吸的生物體中，用于保護(hù)細(xì)胞免受過(guò)氧化氫的毒性作用。促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)，包括 T 細(xì)胞、B 細(xì)胞、髓系白血病細(xì)胞、黑色素瘤細(xì)胞、肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞以及正常和轉(zhuǎn)化的成纖維細(xì)胞。同源四聚體。屬于過(guò)氧化氫酶家族。 |
| UniProt 蛋白質(zhì)詳細(xì)信息： | 蛋白質(zhì)類型：氨基酸代謝 - 色氨酸；內(nèi)質(zhì)網(wǎng); EC 1.11.1.6；細(xì)胞凋亡；能量代謝 - 甲烷；線粒體; 水解酶；氧化還原酶 人類直系同源物的染色體位置： 11p13 細(xì)胞成分：過(guò)氧化物酶體膜；高爾基體; 過(guò)氧化物酶體基質(zhì)；粘著斑；細(xì)胞內(nèi)膜結(jié)合細(xì)胞器；膜; 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)；溶酶體；質(zhì)膜; 線粒體膜間隙；過(guò)氧化物酶體；胞質(zhì)溶膠 分子功能：抗氧化活性；氧化還原酶活性，作用于作為受體的過(guò)氧化物；酶結(jié)合；蛋白質(zhì)同二聚化活性；過(guò)氧化氫酶活性；金屬離子結(jié)合；血紅素結(jié)合；NADP 綁定；氨酰化酶活性；受體結(jié)合 生物過(guò)程：膽固醇代謝過(guò)程；血紅蛋白代謝過(guò)程；核堿基、核苷和核苷酸代謝過(guò)程；嘌呤堿代謝過(guò)程；NF-κB 轉(zhuǎn)錄因子的激活；蛋白質(zhì)同源四聚化；成骨細(xì)胞分化；正調(diào)控磷酸肌醇 3-激酶級(jí)聯(lián)反應(yīng)；對(duì)維生素 E 的反應(yīng)；對(duì)活性氧的反應(yīng)；三酰甘油代謝過(guò)程；對(duì)高氧的反應(yīng)；紫外線防護(hù)；過(guò)氧化氫分解代謝過(guò)程；抑制 NF-κB 轉(zhuǎn)錄因子；輸尿管芽發(fā)育；細(xì)胞分裂的正調(diào)控；對(duì)缺氧的反應(yīng)；有氧呼吸; 嘌呤核苷酸分解代謝過(guò)程；蛋白質(zhì)四聚化；細(xì)胞凋亡的負(fù)調(diào)控；老化 疾病：急性貧血 |
| NCBI總結(jié)： | 該基因編碼過(guò)氧化氫酶，這是人體抵御氧化應(yīng)激的關(guān)鍵抗氧化酶。過(guò)氧化氫酶是一種血紅素酶，存在于幾乎所有需氧細(xì)胞的過(guò)氧化物酶體中。過(guò)氧化氫酶將活性氧類過(guò)氧化氫轉(zhuǎn)化為水和氧氣，從而減輕過(guò)氧化氫的毒性作用。假設(shè)氧化應(yīng)激在許多慢性或遲發(fā)性疾病的發(fā)展中起作用，例如糖尿病、哮喘、阿爾茨海默病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和癌癥。該基因的多態(tài)性與過(guò)氧化氫酶活性降低有關(guān)，但迄今為止，無(wú)過(guò)氧化氫血癥是已知由該基因引起的疾病。[由 RefSeq 提供，2009 年 10 月] |
| UniProt 代碼： | P04040 |
| NCBI GenInfo 標(biāo)識(shí)符： | 115702 |
| NCBI 基因 ID： | 847 |
| NCBI 加入： | P04040.3 |
| UniProt 相關(guān)加入： | P04040 |
| 分子量： | |
| NCBI 全名： | 過(guò)氧化氫酶 |
| NCBI 同義詞全名： | 過(guò)氧化氫酶 |
| NCBI *符號(hào)： | 貓 |
| NCBI 蛋白質(zhì)信息： | 過(guò)氧化氫酶 |
| UniProt 蛋白名稱： | 過(guò)氧化氫酶 |
| 蛋白質(zhì)家族： | 過(guò)氧化氫酶 |
| UniProt 基因名稱： | 貓 |
| UniProt 條目名稱： | CATA_HUMAN |
